DNA的重组方式有哪些?1. 同源重组包括细菌接合、转化和转导。2位点特异性重组发生在两个特定序列之间。三。转位重组4。基因重排5。拷贝选择是RNA病毒使用的一种重组方法基本步骤1。获得目的基因的方法
DNA的重组方式有哪些?
1. 同源重组包括细菌接合、转化和转导。2位点特异性重组发生在两个特定序列之间。三。转位重组4基因重【练:zhòng】排5。拷贝选择娱乐城是RNA病毒使用的一种重组方法
基本(练:běn)步骤
1。获【繁体:獲】得目的基因的方法
包括:基因文【拼音:wén】库(cDNA文库、基因组文库)、PCR(访问效应)、人工合成
2[目{mù世界杯}的基因与载体连接]方法如下:
-粘端-完【pinyin:wán】全同源,定向克隆(两种酶切)
定向克隆可以防止高背景的产生,因为完全同源性会导致载体自连接、重组子和目的澳门新葡京基因自连接三种可能,重组子也可能有正插入和《hé》负插入,这使得筛选过程变得复杂。
酶消化后也可能产生末(pinyin:mò)端,可能出现高背景。
-人工连接体-连接体(连接到带有粘性位点的片段,然后消化)、通用连接体(连接到片段的链成为粘性(练:xìng)末端)、T-a克隆(PCR中使用的Taq聚合酶将根据模板延伸到链的末端,然后在链的末端添加a,可以通过将(繁:將)t加入Kron载体),均聚物尾(末端转移酶尾)反应体系:靶基因,载体,T4连接酶,缓冲液
3方法:氯化钙(拼音:gài)法:DNA及其形成羟基磷酸(suān)钙复合物《练:wù》,抗DNA酶水解),真核转染。
4筛选和鉴[繁:鑑]定
方法:遗传学(表型)-插《练:chā》入失活,蓝白筛【繁:篩】选,耐药基因(四环素四环素、氨苄青霉素amp)
-酶消化,电(繁体:電)泳(分子量,概念)
-世界杯PCR(特异《繁:異》引物)
-免疫法(Western blot)]DNA测序(Sanger,焦磷酸测序)
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