微生物实验技能大赛 微生《练：shēng》物实验是什么？

微生物实验是什么？微生物检验是对部分产品#28主要是直接入口的食品#29细菌污染的定性或定量检验，通常也称卫生检验。目前，我国对食品#28如肉及肉制品、乳及乳制品、蛋品、水产、清凉饮料、罐头、糕点、调味品、蔬菜、瓜果、豆制品、酒类等#29，饮用水、口服及外用药品、化妆品及需灭菌的产品均规定了卫生标准，以严格控制细菌污染，防止各种有害的病原微生物侵入身体而直接危害广大消费者的人身健康

微生物实验是什么？

微生物《pinyin：wù》检验是对部分产品#28主要是直接入口的食品{读：pǐn}#29细菌污染的定性或（练：huò）定量检验，通常也称卫生检验。

目前，我国对食品#28如肉及肉制品、乳及乳制品、蛋品、水产、清凉饮料、罐头、糕点、调味品、蔬菜、瓜果、豆制品、酒类等#29，饮用水、口服及外用药品、化妆品及需灭菌的产品均规定了卫生标准，以严格控制细菌污染，防止各种有害的病原微生物侵入身体而直接危害《读：hài》广大消费者的人身健康。微生物常规检验项目包括细菌总数测定、霉菌总数测定、大肠菌群的检验、肠道致病菌的检验、化脓性致病菌的检验、食物中毒菌的检验、破伤风厌《繁：厭》氧菌的检验、活螨虫及螨虫卵的试验、致贺氏菌、金黄色葡萄球菌的检验《繁体：驗》等等。微生物检验需要严格按照检验程序，检验样品前一定提《练：tí》前对操作环境进行灭菌，操作过程中慎防二次污染。

大肠菌群实验步骤？

水的大肠菌群数是指100 mL水检样内含有的大肠菌群实际数值，以大肠菌群zui近似数#28MPN#29表示。在正常情况下，肠道中主要有大肠菌群、粪链球菌和厌氧芽孢杆菌等多种细菌。这些细菌都可以随人畜排泄物进入水源，由于大肠菌群在肠道内澳门金沙数量多，所以，水源中大肠菌群的数量，是直接反映水源被人畜排泄物污染的一项重要指标。目前，国际上已公认大肠菌群是粪便污染的指标。因而对饮用水必须进[繁：進]行大肠菌群的检查

水中大肠菌群的检测方法，常用多管发酵法和滤膜法澳门巴黎人。多管发酵法可适用于各种水样的检验，但操作繁琐，需要的时间较长。滤膜法仅适用《练：yòng》于自来水和深井水，操作简单、快速，但不适用于杂质较多、易于堵塞滤孔的水样。

材（练：cái）料与器皿

#28—#29培养基《pinyin：jī》

1、普通乳{拼音：rǔ}糖蛋白胨培养液

蛋白胨 10g，乳【rǔ】糖5g，氯化《pinyin：huà》钠 5g，1.6%溴甲酚紫乙醇液 1.0mL，蒸馏水shuǐ 1000mL，pH 7.2~7.4。

将蛋白胨、乳{拼音：rǔ}糖、氯化钠加热溶解于1000mL蒸馏水中，调节pH为7.2~7.4，再（练：zài）加入1.6%溴甲酚紫乙醇液1.0mL，充分混匀，分装于有杜汉氏小管的试管中，每管10mL，115℃灭菌20min。

2、三倍浓缩乳糖蛋[pinyin：dàn]白胨培养液

按上【拼音：shàng】述普通乳糖蛋白胨澳门威尼斯人培养液浓缩三倍配制，分装于有杜汉氏小管的试管中，每管5mL。

1、 品红亚硫酸钠培养[繁：養]基#28供平板分离用#29

蛋白胨 10g， 乳糖 10g，K2HPO4 3.5g，琼脂 15～20g，蒸馏水shuǐ 1000mL，无(繁：無)水亚硫酸钠 5g，5%的碱性品红乙醇溶液 20mL，pH 7.2~7.4。

4、伊红美蓝培养基#28EMB培养基#29#28供发酵法平板分离用，3和4可任选一种#29

蛋{拼音：dàn}白胨10g，乳糖10g，K2HPO4 2.0g，琼脂20g，蒸馏《繁：餾》水1000mL，2%伊红#28曙红#29水溶液 20mL，5%美蓝#28亚甲(读：jiǎ)蓝#29水溶液13mL，pH 7.2~7.4。

#28二#29灭菌移液管、灭菌稀释水（读：shuǐ）、试管、杜汉氏小管、革兰氏染（pinyin：rǎn）色液、灭菌培[练：péi]养皿。

微生{读：shēng}物菌种实验过程

#28一#29水样的采[繁：採]集

供细菌学检验的水样，必须按一般无菌操作的基本要求采集，并保证再运送、贮存过程中不受污染。水样从采集到检验不应超【pinyin：chāo】过4h ，在0～4℃下保存不应超过24h ，如不能在4h 内分析，应在检验报告上注明保存时间[繁：間]和条件。

1、自来水取样：应yīng 在水龙头打开放水5min ，再用无菌容器接取水样，待分析。如水样内含有余氯，则采样瓶灭菌后按（pinyin：àn）每500mL水样加3%Na2S2O3.5H2O溶《pinyin：róng》液1mL。

2、江、河、湖、池自然水体取样：可用采样器，采（读：cǎi）样瓶应先灭菌。采样后，瓶内应留有空隙。如果与其他化验《繁体：驗》项目联合取样，细菌学分析水样应采在其他样品之(zhī)前。

#28二#29初发酵试验《繁：驗》

1、水样稀释：制备水样10-1、10-2的稀释液，方法为用无菌移液管吸取水样10mL放于盛有90mL无菌水和若干玻璃珠的锥形瓶中，充分振荡使混合均匀，并《繁：並》使其中的细菌尽量呈单个存在，即为【pinyin：wèi】10-1稀释液再从10-1制备10-2稀释液。以此类推[pinyin：tuī]，稀释到所需倍数。

2、接种和培《pinyin：péi》养：以【yǐ】无菌操作于5支三倍浓缩培养基#28接种前一定应先检查杜汉氏小管内有无气泡#29中各加入水样10mL，5支普通培养基试管中加入水样1mL，5支普通培养基试管中加入10-1稀释液1mL， 小心混匀放入37℃培养箱中培养24h 。此即5管法。

3、结果观察：37℃中培养24h后取出观察，观察有无气体#28杜汉氏小管内有无皇冠体育气（繁体：氣）体#29和酸产生#28培养基有无变色#29。在48h之间，培养管内倒置的杜汉氏小管内有任何量的气体积累，或培养基颜色从紫色变为黄色，便可初步断定为阳性反应。

若实验所测定的1澳门永利5支管中均为阳性反应，说明浓水样污染严重，可将样品进一步稀释后，再按上述【pinyin：shù】方法接种、培养和观察。

#28三#29平板培（读：péi）养试验

将初发酵实验中产酸产气的后只产酸或只产气的试管中的培养物用yòng 接种环取少许，划线接种在品红亚硫酸钠培养基或伊红美蓝培养基平板上，为了确保获得分离的单菌落，须注{pinyin：zhù}意以下事项：

#281#29划线间距jù 至少相隔0.5厘米

#282#29接种【繁体：種】钉要稍弯

#283#29先对试管轻击并使之倾斜，以免接种针挑取到任何hé 膜状物或浮渣

#284#29划线时要用针尖的弯曲部分接触琼脂培养(繁：養)基平面.以免刮伤或戳破培养基。划线《繁体：線》后培养皿倒置，于37℃培《练：péi》养18～24h。

24h后，观察在平板上出现的单个菌落，其核心有深绿色金属光泽者为较典型的大肠菌群《繁：羣》菌落。尽可能挑取典型的或接近典diǎn 型的大肠菌群菌落，在营养琼脂斜面上划线，置37℃培养24h。挑取斜面培养物制成涂片，进行革兰氏染色，凡属革兰氏阴性杆菌，即确认了大肠菌群细菌的存在.

#28四#29复发酵验证(zhèng)实验

经上述经染色为革兰氏阴性的典型菌落，用接种环刮取部分接种【繁体：種】于盛有乳糖培养基的试《繁：試》管中，在37℃培养24h，阳性反应者即确认为大肠菌群细菌。

微生物《读：wù》菌种结果计算

在初发酵试验中，可能有极少数能发酵乳糖产气的非大肠菌群细菌混在阳性可疑反应管中，通过对初发酵中的阳性可疑管进行平板和复发酵试验，并进行革兰氏染色和细菌形态的观（读：guān）察，可将那些少量的非大肠菌群细菌#28“假阳性管”#29删除去，故在记录时只能把三步试验[繁：驗]都呈阳性的试管计入阳性反应管。

如果初发酵接种水样量为10mL、1mL、0.1mL，可直接查表求出原水样100mL中大肠菌群指（拼音：zhǐ）数#28MPN#29。如果接种水样量低于(繁：於)上述水样量，则经下面的换算式计算。

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