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容晖生物荧光定量检测系统 荧《繁:熒》光定量用什么检测?

2025-02-25 11:45:59Health-Conditions

荧光定量用什么检测?定量PCR:以参照物为标准,对PCR终产物进行分析或对PCR过程进行监测,从而达到评估样本中靶基因的拷贝数,称为定量PCR。定量PCR的可行性定量一般是在PCR扩增的指数期进行的。常见荧光定量PCR方法比较SYBR Green I 检测模式SYBR Green I 是一种能与双链 DNA 结合发光的荧光染料

荧光定量用什么检测?

定量PCR:以参照物为标准,对PCR终产物进行分析或对PCR过程进行监测,从而达到评估样本中靶基因的拷贝数,称【繁体:澳门威尼斯人稱】为定量PCR。定量PCR的可行性定量一般是在PCR扩增的指数期进行的。

常【cháng】见荧光定量PCR方法比较

SYBR Green I 检jiǎn 测模式

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SYBR Green I 是shì 一种能与(繁体:與)双链 DNA 结合发光的荧光染料。其与双链 DNA 结合后, 荧光大大增强。因此, SYBR Green I 的荧光信号强度与双链 DNA 的数量相关,可以根据荧光信(读:xìn)号检测出 PCR 体系存在的双链 DNA 数量。SYBR Green I 的最大吸收波长约为 497nm,发射波长最大约为 520nm。PCR 扩增程序一般为 94℃~55℃~72℃三步法,40 个循环

SYBR Green I 的缺点:由于 SYBR Green I 没有特异(拼音:yì)性,不能识别特定的双链,只要是双链就会结合发光,对 PCR 反应中的非特异性扩【pinyin:kuò】增或引物二聚体也会产生荧光,通常本底较高,所以在临床上使用可能会有假阳性发生。

SYBR Green I 的优点:SYBR Green I 的优点是因为其缺点产生,由于它能所有的双链DNA相结合,所以对不同模板不需特别定制不同的特异性探tàn 针,通用性较好,并且价格相对较低。这对科研是很有利的,因《拼音:yīn》此国内外在科研中使用比较普遍。

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水解探针模【pinyin:mó】式#28Taqman探针#29

TaqMan 探针是一种寡核苷酸探针,荧光基团连接在探针的 5’末端, 而淬灭剂则在 3’末端。当探针与靶序【pinyin:xù】列配对时,荧光基团发射的荧光因与 3’端的淬灭剂接近而被淬灭。在进行延伸反应时,聚合酶的 5’外切酶活性将探针切断,使得荧光基团与淬灭剂分离,发射荧光(拼音:guāng)。一分子的产物生成就伴随着一分子的荧光信号的产生。随着扩增循环数的增加,释放《fàng》出来的荧光基团不断积累

因此 Taqman 探针检(拼音:jiǎn)测的是积累荧光。PCR 扩增程序通《tōng》常是:94℃~60 ℃ 40 个【pinyin:gè】循环。常用的荧光基团是 FAM,TET,VIC,HEX。

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杂交探针模式#28Beacon、FRET#29

分(读:fēn)子信标是一澳门永利种呈发夹结构的茎环双标记寡核苷酸探针,两端的核酸序列互补配对,因此标记在一端的荧光基团与标记在另一端的淬灭基团紧紧靠近。荧光基团被激发后产生的光子被淬灭剂淬灭,由荧光基团产生的能量以红外而不是可见光形式释放出来。分子信标的茎环结构中,环一般为 15-30 个核苷酸长,并与目标序列互补茎一般 5-7 个核苷酸长,并相互配对形成茎的结构。荧光基团标记在探针的一端,而淬灭剂则标记在另一端。在复性温度下,因为模板不存在时形成茎环结构,当加热变性会互补配对的茎环双链解开,如果有模板存在环序列将与模板配对

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与模板配对后,分子信标将成链状而非发夹状,使得荧光基团与淬灭剂分开。当荧光基团被激发时,因淬灭作用被解除,发出激发光子。由于是酶切作用的存在,澳门巴黎人分子信标也是积累荧光。常用的荧光基团《繁:糰》:FAM ,Texas Red 。PCR 扩增程序通常是:94~55~72 ℃三步法,40 个循环

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