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石蜡切片的{de}基本原理

2025-03-25 01:51:24Home-FurnishingsHome

石蜡切片的制作步骤(附图)?1、取材确定所取材料的来源及部位,纵切还是横切;取材要迅速,防止阻止发生进一步变化,材料体积要适宜,下图为植物芽体取样实拍。2、固定最常用的固定液为FAA(万用固定液)。它的优点是材料固定时间不受限制,固定时间短则数小时,长则数月或数年

石蜡切片的制作步骤(附图)?

1、取材

确定所取材料的来源及部位,纵切还是横切;取材要迅速,防止阻止发生进一步(读:bù)变《繁体:變》化,材料体积要适宜,下图为植物芽体取样实拍。

极速赛车/北京赛车2、固定【pinyin:dìng】

最常用的固定液为FAA(万用固定液)。它的优[繁体:優]点是材料固定时间不受限制,固定时间短则数小时,长则数月或数年澳门永利。冲洗或漂洗:组织固定后应充分水洗,除去留在组织内的固定液及其结晶沉淀,否则会影响以后的染色效果。下图为固定液浸泡的组织切块。

3、脱水【读:shuǐ】

目的:水和[读:hé]透明剂不能互溶,只有脱去水分后,才能让透明剂进入。

试剂:梯度酒精溶【拼音:róng】液

流程:70%---85%---95%--100%--- 100% 每步1h-2h左{拼音:zuǒ}右。

注意事项:保(读:bǎo)证脱水梯[tī]度和每一步脱水时间,水要完全脱净,但也不能过度脱水(过久使组织变脆、收缩,这个时[繁:時]间大家可以根据自己的实验来摸索一下,不必完全按照本操作来)。

下图为自动组织脱水机,适于大[dà]量样品{pǐn}组织脱水用。如果材料体积及样品量较少可用小烧杯做容器来进行逐级脱水。

4、浸蜡(là)与包埋

目的:用石蜡取代透明剂,使石蜡浸入组织而起支持[chí]作用。

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(1)低温浸蜡(36℃):接上步,在{zài}有二[拼音:èr]甲苯和材料的烧杯中逐步加碎(读:suì)蜡至过饱和(石蜡不能溶解),过夜12-24h。

(2)高温浸{拼音:jìn}蜡(55-60℃,高于石蜡熔点3℃ ):

将上步二甲苯与石蜡的混合液倒出,不要倒掉(diào)材料,将烧杯中加入纯石《练:shí》蜡,共5-24h。纯石蜡需要更换三次。

关于(繁体:於)石蜡的选择石蜡熔点:

对于较硬的材料,用熔点较高的石蜡进行(拼音:xíng)包埋;

当切片较薄时(在8μm以《pinyin:yǐ》下),选用熔点较高的石蜡包埋;

夏季宜采(cǎi)用熔点较高的石蜡(56,58℃),冬季宜选用熔《拼音:róng》点《繁:點》较低的石蜡(52,54℃)。

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5、切片(pinyin:piàn)

传统的切片方法《读:fǎ》是将包埋好(读:hǎo)的蜡块用刀片修成规整的梯形,粘于小木块上,上机切片。

新型[拼音:xíng]的切片方法是将包埋框(见下图)代替木块的支撑作用,上机切片。切片的厚度可以根据自己的实验要求qiú 来确定,一般在8μm-20μm范围内。(下图为传统切片机与新型自动切片机)

6、粘片澳门新葡京与烤片(读:piàn)

粘片:用粘片剂将蜡片牢附于载[zài]玻《读:bō》片上,防止在后续的操作中材料脱落。在载(繁体:載)玻片上涂抹粘片剂(甲液),再滴蒸馏水(乙液),放上蜡片,用滤纸吸取多余的水分。

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烤片:将载玻片[练:piàn]放于40℃展片台中烤干。

7、脱{繁:脫}蜡与复水、染色

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脱蜡目的:干燥后的切片需脱蜡及复水才能在水溶性染液中进[jìn]行染色。

复水目的:脱蜡(là)后的材料,如果不经过复水,直接进入染色剂中,材料将会严重变(繁体:變)形,甚至难以染色。

染色目的:使细胞组织内的不同结构呈[练:chéng]现不同的颜色和足够强的差异《繁体:異》以便于《繁:於》观察。

总体流程:二甲苯→1/2 二甲(pinyin:jiǎ)苯 1/2纯酒精→100%酒精→95%酒精→85%酒精→番红(4h以上)→95%酒精→固绿(迅速)→95%酒精(迅速《练:sù》)→100%酒精→1/2 二甲苯 1/2纯酒精→二甲苯→二甲苯,以上各级约需5~10分{fēn}钟,已注明时间的除外。

染色剂:1%番红(85%酒精配制)

0.5%固绿[繁体:綠](95%酒精配制)

8、切片脱[繁体:脫]水、透明和封固

接上步,在载玻片上滴加适量(1~2滴)中性树胶,再将洁净盖玻片倾斜放下,进行封片。切片放入42℃温箱中干燥过夜。镜(繁:鏡)检澳门永利,将合格的切片贴上标签。 封固剂选择加拿大树胶(Canada balsam)或中性树胶。至此,植物组织的石蜡切片大功告成!(下图为加拿大树胶)

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