石蜡切片的制作步骤(附图)?1、取材确定所取材料的来源及部位,纵切还是横切;取材要迅速,防止阻止发生进一步变化,材料体积要适宜,下图为植物芽体取样实拍。2、固定最常用的固定液为FAA(万用固定液)。它的优点是材料固定时间不受限制,固定时间短则数小时,长则数月或数年
石蜡切片的制作步骤(附图)?
1、取材确定所取【拼音:qǔ】材料的来源及部位,纵切还是横切;取材要迅速,防止阻止(zhǐ)发生进一步变化,材料体积要适宜,下图为植【练:zhí】物芽体取样实拍。
2、固【拼音:gù】定
最常用的固定液为FAA(万用固定液)。它的优点是材料固定时间不受限制,固定时间短则数小时,长则数月或数年【练:nián】。冲洗或漂洗:组织固定后应充分(练:fēn)水洗,除去留在组织内的固定液及其结晶沉淀,否则会影响以后的染色效果。下图为固定液浸泡的组织切块。
3、开云体育脱(繁体:脫)水
目的:水和透明剂不能互{拼音:hù}溶,只有脱去水分后,才能让透明剂进入。
试剂:梯度(练:dù)酒精溶液
流程:70%---85%---95%--100%--- 100% 每步1h-2h左右(pinyin:yòu)。
注意事项:保证脱{繁:脫}水梯度和每一步脱水时间,水要完全脱净,但也不能过度脱水(过久使组织变脆、收缩,这个时间大家可以根据自己的实验来摸索一下,不必完全按照本操作(zuò)来)。
下图为自动组织脱水机,适于大量样品组织脱水用。如果材料体积及样品量较(jiào)少可用小烧杯做容器来《繁:來》进行逐级脱水。
4、浸蜡与【练:yǔ】包埋
目的:用石蜡取代透明剂,使石蜡浸入娱乐城组{繁体:組}织而起支持作用。
浸蜡程序[xù]:#28恒温#29
(1)低温浸蜡(36℃):接上步,在有二甲[jiǎ]苯和材料的烧杯中(pinyin:zhōng)逐步加碎蜡至过饱和(石蜡不能溶解),过夜12-24h。
(2)高温浸蜡(55-60℃,高于石蜡[繁体:蠟]熔点3℃ ):
将[繁体:將]上[shàng]步二甲苯与石蜡的混合液倒出,不要倒掉材料,将烧杯中加入纯石蜡,共{pinyin:gòng}5-24h。纯石蜡需要更换三次。
关于石{读:shí}蜡的选择石蜡熔点:
对于较硬的材料,用(yòng)熔点较高的石蜡进行包埋;
当切片较薄时(在8μm以下),选用【pinyin:yòng】熔点较高的石蜡包埋;
夏季宜采用熔点较高的石蜡(56,58℃),冬季{读:jì}宜[yí]选用【pinyin:yòng】熔点较低的石蜡(52,54℃)。
5、切片《pinyin:piàn》
传统的切片方法是将包埋好(hǎo)的蜡块用(拼音:yòng)刀片修成规整的梯形,粘于小木【练:mù】块上,上机切片。
新型的切片方法是将包埋{读:mái}框(见下图)代替木块的支撑作用,上机切片{pinyin:piàn}。切片的厚度可以根据自己的实验要求来确定,一般在8μm-20μm范围内。(下图为传统切片机与新[xīn]型自动切片机)
6、粘片与烤片(读:piàn)
粘片:用粘片剂将蜡片牢附于载玻片上,防止在后续的操作中材料脱落。在载玻片上涂抹粘片剂(甲液),再滴蒸馏水[shuǐ](乙yǐ 液),放上蜡片,用滤纸吸取多余的水分。
烤片:将载玻片放于40℃展片台中烤干。
7、脱蜡与复水、染(rǎn)色
脱蜡目的:干燥后的切片需脱蜡及复水【拼音澳门永利:shuǐ】才能在水溶性染液中进行染色。
复(繁体:覆)水目的:脱蜡后的材料,如果不经过复水,直接进入染色剂中,材【拼音:cái】料将会严【练:yán】重变形,甚至难以染色。
染色目的:使细胞组织内的不同结构呈(pinyin:chéng)现不同的颜色和足够强的差异以便于(繁:於)观察。
总体流程:二甲苯→1/2 二甲苯 1/2纯酒精→100%酒{读:jiǔ}精→95%酒精→85%酒精→番红(4h以【pinyin:yǐ】上)→95%酒精→固绿(迅速)→95%酒精(迅速)→100%酒精→1/2 二甲苯 1/2纯酒精→二甲苯→二甲(pinyin:jiǎ)苯,以上各级约需5~10分钟,已注明时间的除外。
染色剂:1%番【拼音:fān】红(85%酒精配制)
0.5%固绿(95%酒[jiǔ]精配制)
8、切片脱水【幸运飞艇读:shuǐ】、透明和封固
接上步,在载玻片上滴加适量(1~2滴)中性树胶,再将洁净盖玻片倾斜放下,进行封片。切片放入42℃温箱中澳门新葡京干燥过夜。镜检,将合格的切片贴上标签。 封固剂选择加拿大树胶(Canada balsam)或中{pinyin:zhōng}性树胶。至此,植物组织的石蜡切片大功告成!(下图为加拿大树胶)
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