DNA的重组方式有哪些?1. 同源重组包括细菌接合、转化和转导。2位点特异性重组发生在两个特定序列之间。三。转位重组4。基因重排5。拷贝选择是RNA病毒使用的一种重组方法基本步骤1。获得目的基因的方法
DNA的重组方式有哪些?
1. 同源重组包括细菌接合、转化和转导。2位点特异性重组发生在两个特定序列之间。三。转位重组4。基因重排5拷贝《繁体:貝》选择是RNA病毒使用的一种重组方法
基本步骤[拼音:zhòu]
1。获得目(读:mù)的基因的方法
包括:基因文库(cDNA文库、基因组文库)、PCR(访问效应)、人工合(繁:閤)成
2[目的基因与载体连接]方(拼音:fāng)法如下:
-粘端-完全(练娱乐城:quán)同源,定向克隆(两种酶切)
定向克隆可以防止高背景的产生,因为完全同源性会导致载体自连接、重组子和目的基因自连接三种可能,重组子(拼音:zi)也可能有正插入和负插入世界杯,这使得筛选过程变得复杂。
酶消(练:幸运飞艇xiāo)化后也可能产生末端,可能出现高背景。
-人工连接体-连接体(连接到带有粘性位点的片段,然后消化)、通用(读:yòng)连接体(连接到片段的链成为粘性末端)、T-a克隆(PCR中使用的Taq聚合酶将根据模板延伸到链的末端,然后在链的末端添加a,可以通过将t加入Kron载体),均聚物尾(末端转移酶尾)反应体系:靶基因[读:yīn],载体,T4连接酶,缓冲液
3方法:氯化钙法:DNA及其形成羟基磷酸钙复合物,抗DNA酶水解),真核转染。
4筛选(繁体:皇冠体育選)和鉴定
方法:遗传学(表型)-插[chā]入失活,蓝白筛【繁体:篩】选,耐药基因(四环素四环素、氨苄青霉素amp)
-酶消化,电泳(分子{pinyin:zi}量,概念)
-PCR(特异引[yǐn]物)
-免疫法(Western blot)]DNA测[繁体:測]序(Sanger,焦磷酸测序)
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