细胞物理破（读：pò）碎方法的优缺点 物理破碎法的优点？

物理破碎法的优点？物理破碎法：指利用温度差、压力差或超声波等将细胞破碎开来。1．用一定功率的超声波处理细胞悬液，使细胞急剧震荡破裂#28借助超声的震动力破碎细胞壁和细胞器）。机制：可能与强声波作用溶液时，气泡产生、长大和破碎的空化现象有关，空化现象引起的冲击波和剪刀力使细胞裂解

物理破碎法的优点？

1．用（pinyin：yòng）一定功率的超声波处理细胞悬液，使细胞急剧震（zhèn）荡破裂#28借助超声的{读：de}震动力破碎细胞壁和细胞器）。

机制：可能与强声波作用溶液时，气泡产生{练：shēng}、长大和破碎的空化(pinyin：huà)现象有关，空化现象引起的冲击波和剪刀力使细胞裂解。

超声波破碎皇冠体育的效率取决于【练：yú】声频、声能、处理时间、细胞浓度和细胞类型等。（使用时注意降温，防止过热）。

2. 高压破碎：细(繁体：細)胞悬浮液从高压室的环状隙喷射到静止的撞击环上，被迫改变方向经出口管流出。此过程中细胞经历了高速造成的剪切的碰撞及高压到常压的{de}变化，从而破碎释放内含物。

这是一种世界杯温和的、彻底破碎细胞的较（繁：較）理想的方法。

3. 反复冻融(读：róng)法：将细胞在-20度以下冰冻，室温融解，反复几次，由于细胞内冰粒形成和剩余细胞液的盐浓度增高引起溶胀，使细胞结构破碎(练：suì)

我想知道细胞破碎的方法及各种方法的原理和优缺点？

1. 组【繁体：組】织捣碎机

将材料配成稀糊状液，放置于筒内约1/3体积，盖紧筒盖，将调速器先拨至最慢处，开动开关后，逐步加速至所需速度。一般用于动物组织、植物(wù)肉质种子、柔嫩的叶(繁：葉)芽等，转速可高达10000rpm/M以上{练：shàng}。由于旋转刀片的机械切力很大，制备一些较大分子如核酸则很少使用。

2. 匀浆{pinyin：jiāng}器

先将剪碎的组织置于管中，再套入研杆来回研磨，上下移动，即可将细胞研碎。匀浆器的研钵磨球和玻璃管内壁之间间隙保持在十分之几毫米距离。制作匀浆器的材料，除【pinyin：chú】玻璃外，还可以用硬质塑料、不锈钢、人造荧光树脂等。此法细胞破碎程度比高速组织捣碎机为高，适用于量(pinyin：liàng)少和动物脏器组织。

存在{练：zài}的问题；较易造成堵塞的团状或丝状真菌，较小的革兰氏阳（繁体：陽）性首以及有[pinyin：yǒu]些亚细胞器，质地坚硬，易损伤匀浆阀，也不适合用该法处理。

3. 研钵[繁体：鉢]

多用(读：yòng)于细菌或其他坚硬植物材料，研磨时常加入少量石英砂，玻璃粉或其他研磨剂，以提高研磨效果《拼音：guǒ》。

4. 细【繁体：細】菌磨

是一种改良了的研磨器，比研钵（读：bō）具有更大的研磨面积，而且低部有出口。操作时先把细菌和研磨澳门永利粉调成糊状，每次加入一小勺，研磨20-30秒即可将细菌细胞完全磨碎。

物理法：主要通过各种物理因素使组织细胞破碎的方(pinyin：fāng)法。在生化制备中常用的方法（读：fǎ）有：

1. 反复冻溶法{fǎ}

原理：因突然冷冻，细[繁体：細]胞内冰晶的形成及 胞内外溶剂浓度的《拼音：de》突然改变《繁：變》而破坏细胞。

方法：将(jiāng)待破碎的娱乐城细胞在-20度以下冰冻，室温融解，反复几次，由于细胞内冰粒形成和剩余细胞液的盐浓度增高引起溶胀，使细胞结构破碎。

特点：此法适用于组织细胞，多《拼音：duō》用于动物性材料，对微生物细胞作用较差。

2. 急热[繁：熱]骤冷法

将材料投入（rù）沸水中，维持85-90分钟，至水浴中急速冷却，此法[练：fǎ]可用于细菌及病毒材料。

3. 超声（繁体：聲）波处理

用一定功率的超声波处理细胞悬液，使细胞急剧震荡破裂，此法多适用{练：yòng}于微生物材料，用大肠杆菌制备各种酶，常选用50-100毫克菌体/毫升浓度，频高于15～20KHz的超声波在高强度声能输入下可以进行细胞破碎。其破碎机理：可kě 能与空化现象引起的冲击波和剪切力有关。超声破碎的效率与声频、声能、处理时间、细胞浓度及首种类型等因素有关。

特点：操作简单，重复（繁：覆）性较好，节省时间{练：jiān}；多用于微生shēng 物和组织细胞的破碎。

存在问题：超声波破碎在实验室规模应用较普遍，处理少量样品时操作简便，液量损失少，但是超声波产生的{de}化学自由基团能使某些敏感性活性物质变性失活。而且大容量装置声能传【pinyin：chuán】递，散热均有困难，应采取相应降温措施。对超声波敏感和核酸应慎用。空化作用是细胞破坏的直接原因，同时会产生活性氧，所以要加一些【读：xiē】巯基保护剂。

化学及生物化学法【读：fǎ】：

1. 自溶《读：róng》法

在一定（dìng）PH和适当《繁体：當》的温度下，利用组织细胞内自身的酶系统将细胞破碎的方法。此过程需较长时间，常用少量防腐剂如甲苯、氯仿等防止细胞的污染。

2. 酶[拼音：méi]溶法

利用各种水解酶，如溶菌酶、纤维素酶、蜗牛酶、半纤维素酶、脂酶等，将细胞壁分解（pinyin：jiě），使细[繁：細]胞内含物释放出来。有些细菌对溶菌酶不敏感，加入少量巯基试剂或8摩尔尿素处理后，使之转为对溶菌酶敏感《拼音：gǎn》而溶解。

特(拼音：tè)点：

a#29 此法适用多种微（wēi）生物；

b#29 具有作用条件温和；

c#29 内含物《读：wù》成分不易受到破坏；

d#29 细胞壁损坏的程度可以控kòng 制。

存在的问题：易造成产物抑制作用，这可能是导致胞内物质释放率低的一个(繁：個)重要因素。而且溶酶价格高，限制了大规模利用。若回收溶酶，则又增加百分离纯化《读：huà》溶酶的操作

另外酶溶法通{pinyin：tōng}用性差，不同菌种需选择不同的酶。有一定局限性，不适宜大量《读：liàng》的蛋白质提取，给进一步纯（繁体：純）化带来困难。

3. 化学渗透法《fǎ》

某些有机溶剂（如苯、甲苯）、抗生素、表面活性剂、金属螯合剂、变性剂等化学药品[练：pǐn]都可以改变（繁体：變）细胞壁或膜的通透性从而使内合物有选择地渗透出来。其作用机理；化学渗透取决于化学试剂的类型以及细胞壁和膜的结{繁体：結}构与组成。

特点：多用于{pinyin：yú}破亚博体育碎细菌，且作用比较温和；提取核酸时，常用此法破碎细胞。

存在《拼音：zài》的问题：时间长，效率低；化学（读：xué）试剂毒性较强，同时对产物也有毒害作用，进一步分离时需要用透析等方法除(pinyin：chú)去这些试剂；通用性差：某种试剂只能作用于某些特定类型的微生物细胞。

小结（繁：結）

无论用哪一种方法破碎组织细胞，都会使细胞内蛋白质或核酸水解酶释放到溶液中，使大分子生物降解，导致天然物质量的减少，加入二异丙基氟磷酸（DFP）可以抑制或减慢自溶作用；加入碘乙酸可以抑制那些活性中心需要有疏基的蛋白水解酶的活性，加入苯甲磺酰氟化物（PMSF）也能清除蛋白水解酶活力，但不是全部，还可通过选择pH、温(繁：溫)度或离子强度等，使(shǐ)这些条件都要适合于目的物质的提取。

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